Questões de Concurso

Um grupo japonês publicou um novo protocolo para a genotipagem de grupo sanguíneo ABO, utilizando iniciadores aleloespecíficos e PCR em tempo real. Pela avaliação de três SNPs situados no gene do ABO, é possível a determinação dos seis principais genótipos do sistema ABO. A ideia do novo protocolo é trabalhar com amostras forenses e fornecer resultados rápidos, visto que o novo método demanda menos de 2 horas e utiliza 2,0 ng de DNA.

T. Muro et al. Determination of ABO genotypes by real-time PCR using allele-specific primers. Tokyo: 2011 (com adaptações).

Considerando as informações do texto, a genotipagem do sistema ABO descrita pelo grupo japonês baseia-se em

(a)

digerir o DNA com enzimas de restrição específicas para os três SNPs, gerando extremidades colantes que serão aderidas aos iniciadores específicos; posteriormente, esse conjunto será submetido à amplificação por PCR em tempo real, e a genotipagem será avaliada após sequenciamento automático.

(b)

gerar pequenos fragmentos genômicos a partir da amplificação por PCR em tempo real com três iniciadores aleloespecíficos, digerir com enzimas de restrição especificas e fazer a genotipagem pelo perfil observado em gel após eletroforese.

(c)

utilizar a PCR em tempo real para amplificar cada SNP com os iniciadores aleloespecíficos, sequenciar os produtos em sequenciadores de segunda geração e, a partir do alinhamento das sequências, definir os genótipos.

(d)

amplificar a região genômica em questão, utilizando PCR em tempo real, com os três pares de iniciadores aleloespecíficos marcados com fluorescência, simultaneamente, e sequenciar o produto desse multiplex para obtenção dos haplótipos que irão possibilitar a definição dos genótipos.

(e)

analisar cada SNP individualmente via PCR em tempo real, utilizando iniciadores aleloespecíficos marcados com fluorescência e, de acordo com a avaliação dos sinais de fluorescência, definir o(s) alelo(s) para cada sítio genômico e, com esses dados, definir os genótipos.