é fundamental que se tenha mais de um tipo de amplicon com diferentes sequências de nucleotídeos como produto de PCR no mesmo tubo para ser empregado na reação de sequenciamento.

é importante ter várias amplificações inespecíficas. E por isso deve-se clonar o produto de PCR em algum plasmídeo.

empregando um fragmento DNA clonado em um plasmídeo, como molde para reações de PCR e posterior sequenciamento, reduz-se a possibilidade de ter amplificações genômicas inespecíficas na reação de sequenciamento.

um clone feito a partir de um produto de PCR sempre representará a sequência do DNA alvo original.

empregando um fragmento DNA clonado em um plasmídeo como molde para reações de PCR e posterior sequenciamento, aumentamos muito a possibilidade de ter amplificações genômicas inespecíficas na reação de sequenciamento.