Questões de Concurso

Durante o planejamento de um experimento de RT-qPCR para avaliar a expressão do gene GAPDH em células humanas, uma pesquisadora observou que um dos pares de primers amplificava tanto o DNA genômico quanto o DNA complementar. Outro par de primers, no entanto, produzia um único produto e ausência de amplificação no controle sem transcriptase reversa (-RT). Conforme os princípios empregados para o desenho de primers para amplificação de DNA complementar, assinale a alternativa correta.

(a)

Primers desenhados em regiões intrônicas evitam a amplificação de DNA genômico, garantindo especificidade para o cDNA.

(b)

O uso de primers que atravessam a junção éxon-éxon impede a amplificação do DNA genômico, assegurando a detecção exclusiva de transcritos.

(c)

A inclusão de regiões ricas em GC nos primers aumenta a eficiência da reação e reduz o risco de amplificação genômica.

(d)

Primers com complementaridade parcial a pseudogenes aumentam a sensibilidade e a especificidade da reação de qPCR.

(e)

O controle -RT é dispensável quando os primers se localizam totalmente dentro de um éxon, pois o cDNA e o DNA genômico terão tamanhos idênticos de amplificação.