Questões de Concurso

Durante a clonagem molecular de um gene de interesse em Escherichia coli, uma pesquisadora preparou células competentes utilizando solução de cloreto de cálcio (CaCl₂) e realizou o processo de transformação por choque térmico, seguido de plaqueamento em meio LB contendo antibiótico. Após incubação, foram observadas colônias em crescimento apenas nas placas contendo o plasmídeo. Considerando os princípios físico-químicos e biológicos envolvidos nessa técnica, é correto afirmar que:

(a)

O aquecimento a 42 °C promove a desnaturação do DNA plasmidial, facilitando sua replicação após o retorno à temperatura ambiente.

(b)

O CaCl₂ atua induzindo a replicação plasmidial e estabilizando o DNA durante a inserção no citoplasma bacteriano.

(c)

A etapa de aquecimento ativa a DNA ligase bacteriana, que integra o DNA plasmidial ao genoma da célula hospedeira.

(d)

A seleção em meio contendo antibiótico visa induzir o promotor do gene inserido no plasmídeo.

(e)

O choque térmico cria um gradiente osmótico temporário que permite a entrada do DNA plasmidial através da membrana celular, após neutralização das cargas negativas pelo Ca²⁺.