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A fusão de proteínas com uma cauda de histidina é comumente empregada na tecnologia recombinante para facilitar a produção, a purificação, e a detecção de uma proteína de interesse. O primeiro passo neste processo é a inserção de uma seqüência que codifica de quatro a dez histidinas consecutivas na região N- ou C-terminal do gene da proteína a ser expressa. A proteína então passa a ter um tag de histidina fusionada a ela e esta proteína de fusão pode ser facilmente purificada usando uma cromatografia de afinidade cuja resina é imobilizada com metal.
Com base nessa informação, assinale alternativa correta.
O Western blot é uma técnica analítica usada para detectar uma proteína especifica em um extrato de células. A detecção ocorre com o uso de anticorpos específicos para a proteína alvo. Sobre o tema, assinale a alternativa correta.
Analise as afirmativas a seguir.
I. Os vetores para expressão em mamíferos contém sequências que facilitam a propagação em bactéria, bem como sequências específicas para permitir a expressão em células eucarióticas.
II. O vetor para expressão em células de mamíferos não precisa de uma origem de replicação para células eucarióticas.
III. O sistema de expressão em células de mamíferos podem ser divididos em dois tipos conhecidos como transiente e estável, que envolve a integração do gene no DNA cromossômico.
Assinale:
O ensaio de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay, em inglês) é uma técnica usada principalmente em imunologia para detectar e titular uma molécula de interesse presente tanto na amostra bruta como na pura. Considerando esta informação, escolha a melhor alternativa sobre a realização desta técnica.
O gene da proteína KLM04 foi inserido no plasmídeo de expressão pGEX-2T, que expressa a proteína recombinante em fusão com a GST (Glutationa-S-Transferase) uma enzima de 25,8 kDa. Essas proteínas de fusão são normalmente produzidas em quantidade apreciável por Escherichia coli e são facilmente purificáveis, por cromatografia em coluna de afinidade. Com bases nestas informações, assinale a alternativa correta.
