Considerando os resultados em testes fenotípicos convencionais utilizados na identificação de micobactérias, indique a alternativa incorreta.

A baciloscopia é uma metodologia rápida, de baixo custo, útil no diagnóstico da tuberculose pulmonar. Em escarro espontâneo de pacientes sintomáticos respiratórios, o valor preditivo positivo para M. tuberculosis está geralmente acima de 90%.

No diagnóstico bacteriológico, as micobactérias são Grampositivas fracas, sendo então submetidas a procedimentos que permitem a detecção de sua resistência a álcool-ácido. Essa propriedade, presente em outros gêneros bacterianos, pode levar ao diagnósitico impreciso, devendo ser confirmado por cultura e por identificação definitiva.

Considerando os princípios da baciloscopia, assinale a alternativa incorreta.

A análise de ácidos micólicos é recomendada como um dos critérios mínimos para a descrição de novas espécies de micobactérias. Esses compostos consistem em ácidos graxos beta-hidroxi alfa substituídos com massa molecular elevada presentes na parede celular de micobactérias. Sobre a ordem correta dos procedimentos para extração de ácidos micólicos de micobactérias, assinale a alternativa correta.

As micobactérias consistem em bacilos álcool-ácidos resistentes (BAAR) por resistirem à descoloração com etanol acidificado pela metodologia tradicionalmente denominada baciloscopia.

Sobre os detalhes técnicos para a metodologia citada quando aplicada para espécime clínico do tipo escarro espontâneo e de forma direta, analise as seguintes afirmativas.

I. O número mínimo de BAAR necessário para produzir um esfregaço com resultado positivo é estimado entre 100 a 1000 por mililitro (probabilidade de 50% de resultado positivo).

II. A Secretaria de Vigilância em Saúde do Ministério da Saúde recomenda, para o preparo do esfregaço, o uso de Bico de Bunsen ou Cabine de Segurança Biológica, de luvas e de outros Equipamentos de Proteção Individual, em área exclusiva apropriada, sem circulação de pessoas, sem correntes de ar, e com exaustor contendo renovação do ar (seis a 10 renovações por hora).

III. A técnica mundialmente utilizada consiste na coloração do esfregaço pelo método de Ziehl-Neelsen sob metodologia padronizada e observação em microscopia de campo claro com uso de óleo mineral e aumento total de 100X.

Assinale:

Bownds e colaboradores (1996) realizaram um dos estudos pioneiros sobre o uso da citometria de fluxo em testes de susceptibilidade a antimicrobianos. Tais pesquisadores usaram a cepa Mycobacterium fortuitum ATCC 14467 e o corante diacetato de fluoresceína (FDA) nos ensaios com antimicrobianos para determinar a concentração mínima inibitória. Na primeira parte do ensaio, os autores avaliaram o padrão de interação do corante com a cepa micobacteriana (viável ou inativada pelo calor) e com o meio de cultura, o qual poderia levar à interpretação errônea dos resultados quanto à fluorescência. Após a incubação, um volume de 10ml de FDA (10 mg/ml; Sigma) foi adicionado às soluções de meio de cultura com células cultivadas por sete dias a 37°C de M. fortuitum ou ao controle negativo de forma a obter uma concentração final de 100 ng/ml.

As suspensões foram incubadas a 37°C por 30 min e analisadas a 488nm com FACScam flow cytometer (Becton Dickinson Immunocytometry Systems) utilizando FAC Scan Lysys II software para a acquisição de dados e análise. Os gráficos resultantes estão na figura abaixo.



Legenda da Figura: Os números nos eixos y e x de cada painel são 100, 101, 102, 103 e 104, respectivamente.

Usando seus conhecimentos de citometria de fluxo e micobacteriologia laboratorial, assinale a alternativa correta.