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I. O valor de Ct é inversamente proporcional à quantidade inicial de DNA alvo na amostra; quanto menor o Ct, maior a concentração de partida.
II. As sondas TaqMan utilizam a atividade exonuclease 5' - > 3' da Taq DNA polimerase para clivar a sonda hibridizada, separando o fluoróforo repórter do quencher e gerando sinal.
III. O uso de corantes intercalantes como SYBR Green confere maior especificidade que as sondas TaqMan, pois eles se ligam apenas à sequência alvo específica, ignorando dímeros de primers.
Está correto o que se afirma em:
I.10 µL de solução de enzima. II.50 µL de tampão de fosfato. III.750 µL de solução salina.
assinale a alternativa que apresenta a combinação de pipetas de precisão mais recomendada para os volumes indicados.
A reação em cadeia da polimerase (PCR) e suas variações, como a PCR em tempo real (qPCR) e a PCR com transcrição reversa (RT-PCR), são amplamente utilizadas no diagnóstico molecular de doenças infecciosas. Diante do exposto, analise as afirmativas a seguir.
I. A PCR convencional e qPCR requerem necessariamente uma etapa de detecção pós-amplificação por eletroforese em gel de agarose.
II. Como o HCV é um vírus de DNA, não é necessária a transcrição reversa em cDNA para amplificação por PCR.
III. Na PCR convencional ou qPCR, a temperatura de anelamento dos primers deve ser sempre igual à temperatura de desnaturação para evitar amplificação inespecífica.
IV. Na PCR convencional, primers são sequências de RNA que direcionam a síntese de DNA pela DNA polimerase.
Está INCORRETO o que se afirma em
