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O Tratado de Madrid, assinado em 1750, foi um divisor de águas na definição das fronteiras e na consolidação do domínio português sobre vastas áreas da América do Sul, incluindo territórios que hoje pertencem ao estado de Rondônia. Este acordo redefiniu a posse territorial com base no princípio do uti possidetis.
A expedição de Francisco de Chaves, ocorrida no século XVI, é um marco inicial na exploração europeia do vale do Rio Guaporé, região que viria a fazer parte do futuro estado de Rondônia. Embora não tenha resultado em ocupação efetiva, sua passagem é relevante para a história da presença europeia na Amazônia.