Durante a caracterização cinética de uma enzima envolvida no metabolismo energético, um pesquisador observou que a velocidade da reação aumentava proporcionalmente à concentração de substrato até certo ponto. Em concentrações mais elevadas, contudo, a velocidade começou a diminuir significativamente, sem alterações no pH, na temperatura, na concentração enzimática ou no produto da reação. Com base nas informações, assinale a alternativa correta.

Durante um ensaio cinético em laboratório, uma pesquisadora avaliava duas enzimas distintas que catalisavam a mesma reação metabólica. Após a coleta dos dados e ajuste ao modelo de Michaelis-Menten, ela observou que ambas as enzimas atingiam a mesma velocidade máxima (Vmax). No entanto, notou que os valores de km eram diferentes: enquanto a enzima A apresentava um km relativamente baixo, a enzima B demonstrava um km bastante elevado. Considerando as observações feitas pela pesquisadora, é correto afirmar que:

A determinação da carga líquida de uma proteína pode ser estabelecida pelo balanço entre seus resíduos de aminoácidos carregados. Ao ser submetida a um campo elétrico em meio aquoso, essa molécula proteica migra em direção ao polo de carga oposta. A velocidade de migração é influenciada criticamente pela carga líquida da proteína, seu tamanho (massa molecular) e sua forma estrutural. Essa propriedade físico-química é o fundamento da eletroforese em gel de poliacrilamida-SDS (SDS-PAGE), uma técnica essencial na análise laboratorial de proteínas. A respeito da técnica SDS-PAGE para separação de proteínas, analise as assertivas a seguir:

I. É um método de separação utilizado para purificar apenas proteínas solúveis em água.
II. A estrutura nativa das proteínas é desnaturada em uma solução que inclui um detergente aniônico.
III. Agentes redutores, como o β-mercaptoetanol, são adicionados para romper ligações dissulfeto, de forma que os polipeptídeos constituintes possam ser analisados separadamente.
IV. O tamanho do poro do gel pode ser ajustado de maneira que seja suficientemente grande para retardar a migração das moléculas proteicas de interesse.


Quais estão corretas?

A cromatografia líquida representa um conjunto de técnicas empregadas na separação, purificação e caracterização de biomoléculas, como proteínas e peptídeos. A escolha da técnica adequada depende tanto das propriedades físico-químicas da molécula-alvo quanto do objetivo experimental, exigindo compreensão detalhada dos princípios de cada abordagem. Sobre as diferentes técnicas de cromatografia líquida, analise as assertivas abaixo:

I. Na cromatografia de fase reversa, compostos apolares são eluídos antes, enquanto os compostos polares ficam retidos na coluna e são eluídos tardiamente, à medida que a proporção de solvente orgânico na fase móvel aumenta.

II. Na cromatografia de troca iônica, o gradiente salino compete com a proteína pelos sítios de ligação.

III. Na cromatografia de gelfiltração, as moléculas maiores são eluídas primeiro, pois não penetram nos poros da matriz.

IV. Na cromatografia de imunoafinidade, a eficiência da recuperação e captura do analito independem das condições de pH.


Quais estão corretas?

Durante a purificação de uma enzima vegetal, o pesquisador aplicou o método de salting-out utilizando sulfato de amônio em diferentes níveis de saturação. Observou-se que, conforme a concentração do sal aumentava, distintas frações proteicas se precipitavam em etapas sucessivas. Com base nos fundamentos desse processo, assinale a alternativa correta.